X
تبلیغات
انجمن علمی میکروبیولوژی

قالب پرشین بلاگ


انجمن علمی میکروبیولوژی
دانشگاه آزاد اسلامی واحد همدان

مقدمه

فرض کنید نمونه ای دارید که این نمونه شامل انواع گوناگونی از باکتری هاست و می خواهید از نمونه مورد آزمایش فقط یک نوع باکتری را بردارید، این کار غیر ممکن است و هرگز این روش را بکار نبرید. اولین کاری که بایستی انجام دهید این است که یک محیط جامد یا نیمه جامد  تهیه کنید.[1,2] این محیط باید کلیه ی مواد غذایی مورد نیاز برای رشد باکتری ها را داشته باشد تا باکتری بتواند از آن مواد به عنوان غذا استفده کند. حال ، اگر نمونه را به صورت خطی برروی محیط های غذایی جامد کشت بدهید فرض می شود که هر نوع باکتری در این محیط رشد و تکثیر خواهد کرد. پس از مدتی محیط کشت از کلنی های باکتری پوشیده خواهد شد.[1]

 کلنی های باکتری با چشم غیر مسلح قابل دیدنن می باشند ، هر کلنی از میلیون ها باکتری تشکیل شده است که همه آنها از یک باکتری حاصل شده اند. حال، اگر  یک سوزن استریل را به یک کلونی تماس دهید و بعد باکتری ها جدا از  ارگانیسم های دیگر می شوند، در نتیجه ، یک کشت خالص را با روش دقیق می توان بررسی کرد زیرا یک باکتری از باکتری های دیگر مجزا است.[1]

اولین کشت خالص

 بیشتر کارهای اولیه مربوط به تکنیکهای کشت خالص بوسیله Brefeld هنگام کار با قارچ ها انجام گرفت ، او برای جدا ساختن یک سلول و کشت قارچ ها برروی محیط کشت جامد، به محیط کشت مایع ژلاتنین اضافه می کرد. روش کار او برای جداسازی و تهیه ی کشت خالص از قارچ ها خوب بود ولی برای جدا کردن باکتری های کوچک روش کاملاً مفیدی نبود.[2]

روش بهتر و مطمئن تری در همان زمان بوسیله J.schroeter که مشاهده نموده بود برروی محیطهای جامد  مانند  سیب زمینی ، نان و آلبومین تخم مرغ باکتری های رشد نمود و در یک کلونی  همه از یک نوع می باشند.[1,2]

 ژلاتین اولین ماده ای که برای سفت نمودن محیط کشت مایع توسط کخ مورد استفاده قرار گرفت. به دلایلی ماده ی کاملاً خوبی نمی باشد زیرا در اثر فعالیت میکروب ها مایع می گردد. زیرا نوعی پروتئین است[2] یک ماده جلمد کننده دیگری (آگار) در زمان کوتاهی مورد توجه قرارگرفت[2].

 آگار ماده ای پلی ساکاریدی است که از نوعی جلبک تهیه می شود، آگار در حرارت 100   ذوب می شود و به همین علت برای رشد باکتری هائی که در درجاتی کمتر از این درجه رشد می نمایند مفید می باشد.[1.2.3]

روش های کشت خالص :

برای اینکه بتوانیم از باکتری کشت خالص تهیه کنیم، از دو روش می توان استفاده کرد

  •  روش خطی (Streak_plate):در این روش محیط های غذایی محتوی آگار را استریل کرده و بگذارید که محیط تهیه شده 40   سرد شود ، سپس در شرایط استریل آنها را در داخل تپری دیش های استریل تقسیم کنید. پس از آن که محیط در داخل تپری دیش سفت شده با استفاده از لوپ نمونه را برداشته و به طور عرضی برروی سطح محیط کشت غذایی آن را کشت دهید.[1]
  • روش ریختن محیط(pour_plate): پلیتی که باکتری ها برروی آن پخش می کنید، محتوی محیطی است که دارای مواد غذایی لازم برای باکتری و همچنین حاوی ماده آگار است.مخلوط مواد غذایی و آگار محیط کشت (Medium) می گویند.

فاکتور های محیطی موثر برروی رشد:

در یک محیط رشد مناسب بایستی تمامی مواد غذایی ارگانیسم و فاکتورهایی از قبیل PH مناسب و هوا دهی محیط به دقت تحت کنترل باشند [3].

دو مشکل عمده در ارتباط با کشت باکتری ها وجود  دارد: 

  •  در ارتباط با انتخاب یک محیط کشت مناسب
  • در ارتباط با جداسازی باکتر در کشت خالص [2,3]

روش کار:

وسایل مورد نیاز: لوپ(سیم تلقیح یا میل  دو پلاتین)، شعله ، محیط کشت تهیه شده از آگار و آماده ، نمونه

ابتدا لوپ را برروی شعله قرار  می دهیم تا کاملاً استریلیزه شود سپس  با استفاده از لوپ از نمونه برداشته و به صور عرضی برروی سطح محیط کشت غذایی آن را کشت می دهیم.

این را 5 مرتبه در جهت به صورت چرخشی تکرار کرده و هر بار لوپ را استریل کرده در هنگام کشت محیط کشت را در مجاور یا نزدیکی شعله قرار می دهیم و عمل کشت را انجام نمی دهیم.

 

دانلود این مقاله همراه با عکس (pdf)
کپی برداری با ذکر  منبع مجاز می باشد.

 

                                                                                                                        

منابع:

1.      ولک ، وزلی . ولراکارگات. ترجمه نجفی یا لوری، فاضل. میکروبیولوژی عمومی .نشر دانشگاه گیلان

2.      آل محمد ، محمد مهدی. میکروبیولوژی ، باکتریولوژی

3.      بروکس، جاوتز.باتل ،ملنیک.مورس ، آدلبرگ. ترجمه، رحیمی، محمد کریم و اطهری. میکروب شناسی پزشکی جاوتز

[ پنجشنبه بیست و چهارم شهریور 1390 ] [ 14:57 ] [ جواد بابایی ]

.: Weblog Themes By Iran Skin :.

درباره وبلاگ

این وبلاگ در تاریخ 22/4/1390 ایجاد شده است .
سعی ما بر این است که بتوانیم خدماتی درخور دوستان و دانشجویان عزیز ارائه دهیم .
امکانات وب